共聚焦成像的圖片如何定量

❶ 共聚焦顯微鏡軟體怎麼測量截面距離

從一個點光源發射的探測光通過透鏡聚焦到被觀測物體上，如果物體恰在焦平面的二倍焦點上，那麼反射光通過原透鏡應當匯聚回到光源，這就是所謂的共聚焦，簡稱共焦。
其意義是：通過移動透鏡系統可以對一個半透明的物體進行三維掃描。共聚焦顯微鏡能提供無比精確的三維成像，以及對亞細胞結構和動力學過程的精準測試。

❷ 激光掃描共聚焦熒光顯微鏡的共聚焦掃描顯微鏡的成像原理

採用點光源照射標本，在焦平面上形成一個輪廓分明的小的光點，該點被照射後發出的熒光被物鏡收集，並沿原照射光路回送到由雙向色鏡構成的分光器。分光器將熒光直接送到探測器。光源和探測器前方都各有一個針孔，分別稱為照明針孔和探測針孔。兩者的幾何尺寸一致，約100-200nm；相對於焦平面上的光點，兩者是共軛的，即光點通過一系列的透鏡，最終可同時聚焦於照明針孔和探測針孔。這樣，來自焦平面的光，可以會聚在探測孔范圍之內，而來自焦平面上方或下方的散射光都被擋在探測孔之外而不能成像。以激光逐點掃描樣品，探測針孔後的光電倍增管也逐點獲得對應光點的共聚焦圖像，轉為數字信號傳輸至計算機，最終在屏幕上聚合成清晰的整個焦平面的共聚焦圖像。
每一幅焦平面圖像實際上是標本的光學橫切面，這個光學橫切面總是有一定厚度的，又稱為光學薄片。由於焦點處的光強遠大於非焦點處的光強，而且非焦平面光被針孔濾去，因此共聚焦系統的景深近似為零，沿Z軸方向的掃描可以實現光學斷層掃描，形成待觀察樣品聚焦光斑處二維的光學切片。把X-Y平面（焦平面）掃描與Z軸（光軸）掃描相結合，通過累加連續層次的二維圖像，經過專門的計算機軟體處理，可以獲得樣品的三維圖像。
即檢測針孔和光源針孔始終聚焦於同一點，使聚焦平面以外被激發的熒光不能進入檢測針孔。
激光共聚焦的工作原理簡單表達就是它採用激光為光源，在傳統熒光顯微鏡成像的基礎上，附加了激光掃描裝置和共軛聚焦裝置，通過計算機控制來進行數字化圖像採集和處理的系統。

❸ 怎樣將激光共聚焦顯微鏡測定細胞內鈣離子濃度時得到的圖像轉變為數據

沒圖片？
你既然說像坐標上畫的曲線一樣，那麼曲線對應的縱軸就該是熒光強度吧，這個軸上的數值變化就代表了熒光強度的變化。這個熒光強度的變化就代表了鈣離子濃度的變化。 我覺得你直接用熒光強度值的變化代替鈣離子濃度變化就可以了。你的研究意義該是鈣離子濃度的變化吧？

當然，如果你非要將熒光強度值換算成鈣離子濃度，你需要做下列工作。
1 取一個標准鈣離子濃度，染色後用共聚焦顯微鏡測熒光強度，
2 標准樣和你的樣品需要同樣的成像環境，主要是曝光時間，和相同的激光波長及能量
3 標准樣和你的樣品要用同樣濃度的熒光染料
這是，你才能根據標准樣和熒光強度的關系，推算樣品中鈣離子濃度。

❹ 關於激光共聚焦顯微鏡拍照後圖像的標尺什麼意思

標尺在圖片上用來對目的圖像做一個參照
告訴讀者是目的圖像是多大的
100x，200x，400x 跟這個意義是一樣的
只是標示方法不一樣而已
至於換算的話不同放大的倍數 標尺長度都是不一樣的
一般情況下難以說一個具體的換算方法

❺ 激光共聚焦顯微鏡對載體表面熒游標記蛋白質能定量嗎

坦白的講，以我對
共聚焦
熒光顯微鏡
的了解，只能對熒光強度定性，不能定量。因為調焦是人為控制的，手動調焦需要人的眼睛來判斷焦距是否調的很好，而這是不可能實現在相同條件下的熒光記錄和分析的，焦距的微小改變能夠很大程度上影響熒光強度的變化。所以，這並非造假，而是
實驗設計
本身的特點所決定的。文獻中的定量分析，個人認為需要有折扣的相信。
另外，
熒光定量
分析最准確的方法是
流式細胞儀
分析。

❻ 共聚焦顯微技術的共聚焦顯微技術的優點

成像清晰
由於利用光學或數字技術消除了聚焦平面以外的熒光信號的干擾, 使我們要分析的區域內的圖像清晰度提高, 得到更為准確的定位和定量信息。
連續片層掃描及圖像重組
共聚焦顯微鏡在計算機的控制下可以對樣品中的不同層面進行連續逐層掃描, 以獲得各個層面的圖像, 層面之間的間距可以達到0. 1微米甚至更小, 在圖像獲得後由計算機自動將這些圖形重組為三維圖像。與普通光學照相機獲得的圖像比較,共聚焦所得到的重組三維立體圖形清晰度高、層次分明、立體感更強, 通過計算機軟體處理, 可以對三維圖形進行任何形式的旋轉, 可以從任何角度進行觀察, 還可以對細胞內的某個選定結構進行長度、體積的測量和計算, 在分析細胞內的空間結構和某些物質在細胞內的精確定位方面具有明顯的優勢, 這也是共聚焦顯微技術諸多功能中應用最廣泛的一種。
多標記技術
利用共聚焦系統可以同時對利用兩種或三種不同的熒光染料分別標記了細胞的不同結構(如分別標記染色體和細胞骨架系統) 的樣品進行觀察, 這樣一次實驗觀察就可以獲得細胞內不同結構的信息, 對不同結構組分的定位、相互聯系方式進行研究。在最終獲得的圖像可以分開表示單個結構; 也可以將圖片迭加在一起, 用不同顏色表示不同的結構, 更加直觀, 這是普通熒光顯微鏡無法做到的。
活體觀察
除了可以對固定標本的細胞進行觀察外, 共聚焦顯微技術還可以在不對細胞進行固定或其他損傷性處理的情況下進行觀察, 獲得活細胞內 的信息, 顯示在活體情況下細胞內的真實結構和生理學特徵。更為重要的是利用共聚焦顯微鏡可以跟蹤自然狀態下或受某種因素刺激後活細胞內的結構和生理過程隨時間變化的情況, 得到准確而直觀的動態變化資料, 為分析細胞內的生理生化反應提供直接的實驗數據。
獲得數量化信息
共聚焦顯微技術不僅能夠對細胞內熒光進行定位, 還可以對其進行定量分析, 獲得二維或三維空間內分布在樣品不同部位的熒光強度數值以及熒光強度在各種處理條件下的變化情況。量化信息的獲得是研究活細胞內生理生化反應時重要的手段, 而共聚焦顯微技術在這一方面的優勢是其他技術所無法達到的。

❼ 共聚焦顯微鏡的基本原理

傳統的光學顯微鏡使用的是場光源，標本上每一點的圖像都會受到鄰近點的衍射或散射光的干擾；激光掃描共聚焦顯微鏡利用激光束經照明針孔形成點光源對標本內焦平面的每一點掃描，標本上的被照射點，在探測針孔處成像，由探測針孔後的光電倍增管（PMT）或冷電耦器件（cCCD）逐點或逐線接收，迅速在計算機監視器屏幕上形成熒光圖像。照明針孔與探測針孔相對於物鏡焦平面是共軛的，焦平面上的點同時聚焦於照明針孔和發射針孔，焦平面以外的點不會在探測針孔處成像，這樣得到的共聚焦圖像是標本的光學橫斷面，克服了普通顯微鏡圖像模糊的缺點。

❽ 怎麼用zen 統計激光掃描共聚焦 熒光亮度分布

激光掃描共聚焦顯微鏡（Confocal laser scanning microscope，CLSM)是近代最先進的細胞生物醫學分析儀器之一。目前，激光掃描共聚焦顯微技術已用於細胞形態定位、立體結構重組、動態變化過程等研究，並提供定量熒光測定、定量圖像分析等實用研究手段，結合其他相關生物技術，在形態學、生理學、免疫學、遺傳學等分子細胞生物學領域得到廣泛應用。

1. 組織和細胞中的定量熒光測定

2. 激光掃描共聚焦顯微鏡可以從固定和熒光染色的標本以單波長、雙波長或多波長模式，對單標記或多標記的細胞及組織標本的共聚焦熒光進行數據採集和定量分析,同時還可以利用沿縱軸上移動標本進行多個光學切片的疊加， 形成組織或細胞中熒游標記結構的總體圖像,以顯示熒光在形態結構上的精確定位。 常用於原位分子雜交、腫瘤細胞凋亡觀察、單個活細胞水平的 DNA 損傷及修復等定量分析。

3. 2. 細胞間通訊的研究

4. 動物和植物細胞中縫隙連接介導的胞間通信在細胞增殖和分化中起著重要作用。 激光掃描共聚焦顯微鏡可通過觀察細胞縫隙連接分子的轉移來測量傳遞細胞調控信息的一些離子、小分子物質。 該技術可以用於研究胚胎發生、生殖發育、神經生物學、腫瘤發生等過程中縫隙連接通訊的基本機制和作用，也可用於鑒別對縫隙連接作用有潛在毒性的化學物質。

5. 3. 細胞物理化學測定

6. 激光掃描共聚焦顯微鏡可對細胞形狀、周長、面積、平均熒光強度及細胞內顆粒數等參數進行自動測定。 能對細胞的溶酶體、線粒體、內質網、細胞骨架、結構性蛋白質、DNA、RNA、酶和受體分子等細胞內特異結構的含量、組分及分布進行定量、定性、定時及定位測定。

7. 4. 細胞內鈣離子和 pH 值動態分析

8. 激光掃描共聚焦顯微鏡技術是測量若干種離子濃度並顯示其分布的有效工具，對焦點信息的有效辨別使在亞細胞水平顯示離子分布成為可能。 利用熒光探針，激光掃描共聚焦顯微鏡可以測量單個細胞內 pH 和多種離子(Ca2+、K+、Na+、Mg2+)在活細胞內的濃度及變化。 一般來說，電生理記錄裝置加攝像技術檢測細胞內離子量變化的速度相對較快,但其圖像本身的價值較低,而激光掃描共聚焦顯微鏡可以提供更好的亞細胞結構中鈣離子濃度動態變化的圖像,這對於研究鈣等離子細胞內動力學有意義。

9. 4. 三維圖像的重建

10. 傳統的顯微鏡只能形成二維圖像，激光掃描共聚焦顯微鏡通過對同一樣品不同層面的實時掃描成像，進行圖像疊加可構成樣品的三維結構圖像。 它的優點是可以對樣品的立體結構分析，能十分靈活、直觀地進行形態學觀察,並揭示亞細胞結構的空間關系。

11. 5. 熒光漂白恢復技術

12. 該方法的原理是一個細胞內的熒光分子被激光漂白或淬滅，失去發光能力，而鄰近未被漂白細胞中的熒光分子可通過縫隙連接擴散到已被漂白的細胞中，熒光可逐漸恢復。 可通過觀察已發生熒光漂白細胞其熒光恢復過程的變化量來分析細胞內蛋白質運輸、受體在細胞膜上的流動和大分子組裝等細胞生物學過程。

13. 6. 長時程觀察細胞遷移和生長

14. 活細胞觀察通常需要一定的加熱裝置及灌注室，以保持培養液的適宜溫度及 CO2 濃度的恆定。 目前的激光掃描共聚焦顯微鏡，其光子產生效率已大大改善，與更亮的物鏡和更小光毒性的染料結合後可以減小每次掃描時激光束對細胞的損傷,用於數小時的長時程定時掃描,記錄細胞遷移和生長等細胞生物學現象。

15. 7. 在細胞及分子生物學基礎研究中的應用

16. 激光掃描共聚焦顯微鏡應用照明針與檢測孔共軛成像，有效抑制了焦外模糊成像並可對標本各層分別成像，對活細胞行無損傷的「光學切片」這種功能也被形象的稱為「顯微 CT」。CLSM 還可以對貼壁的單個細胞或細胞群的胞內、胞外熒光作定位、定性、定量及實時分析，並對胞內成分如線粒體、內質網、高爾基體、DNA、RNA、Ca2+、Mg2+、Na+ 等的分布、含量等進行測定及動態觀察，使細胞結構和功能方面的研究達到分子水平。

17. 8. 在腫瘤和物篩選研究中的應用

18. 普通顯微鏡及電子顯微鏡，僅能對腫瘤相關抗原進行定性分析，而 CLSM 則可對單標記或者多標記細胞、組織標本及活細胞進行重復性極佳的熒光定量分析，從而對腫瘤細胞的抗原表達、細胞結構特徵，抗腫瘤物的作用及機制等方面定量化。

19. 9. 在血液病學和醫學免疫學研究中的應用

20. 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察免疫細胞和系統，如樹突狀細胞、單核-吞噬細胞系統、自然殺傷細胞、淋巴細胞時，在准確細胞定位的同時有效鑒定免疫細胞的性質。

21. 10. 在大腦和神經科學中的應用

22. 激光掃描共聚焦顯微鏡分層掃描發現神經軸突的內部結構連續性好。用激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察到腦干組織中神經軸突的正常走向，可排除在熒光顯微鏡下由此造成的一些病理假象。並且激光掃描共聚焦顯微鏡能觀察神經軸突的三維結構，因此應用 CLSM 有可能觀察到普通光鏡下未能發現的神經組織的細微病變。

23. 11. 在眼科研究中的應用

24. 利用激光掃描共聚焦顯微鏡可以觀察晶狀體，角膜、視網膜、虹膜和睫狀體的結構和病理變化。

25. 12. 在骨科研究領域中的應用

26. 激光掃描共聚焦顯微鏡在骨科研究領域的應用現狀表明，CLSM在觀測骨細胞形態學研究、骨細胞特異性蛋白（骨鈣素）以及骨細胞之間的相互作用具有顯著的優勢。
    

❾ 共聚焦成像技術特點

共聚焦成像技術特點：多點高速，高靈敏度共聚焦成像，其採集速度比普通點掃描共聚焦技術快至20倍。另外採用高分辨，高靈敏的探測器，有效減少活細胞成像的光毒性及光漂白，同時也適合於固定樣品的高分辨快速三維成像。

共聚焦顯微技術按照顯微鏡構造原理的不同分成激光掃描共聚焦和數字共聚焦顯微技術兩種。共聚焦技術具有成像清晰、獲得三維圖像、進行多標記觀察、活細胞內動態生理反應的實時觀察記錄、定性定量分析等優勢。與共聚焦顯微技術相關的技術有熒光染料的選擇、熒光指示劑裝載以及圖像數據處理等。

共聚焦顯微技術

是近十幾年迅速發展起來的一項高新研究技術，目前應用領域擴展到細胞學、微生物學、發育生物學、遺傳學、神經生物學、生理和病理學等學科的研究工作中，成為現代生物學微觀研究的重要工具。

共聚焦顯微技術按照顯微鏡構造原理的不同分成激光掃描共聚焦和數字共聚焦顯微技術兩種。共聚焦技術具有成像清晰、獲得三維圖像、進行多標記觀察、活細胞內動態生理反應的實時觀察記錄、定性定量分析等優勢，可以應用於亞細胞水平中觀察離子水平的變化並結合電生理等技術觀察細胞生理活動與細胞形態及運動變化的相互關系等。